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生化试剂盒试验步骤

发表时间:2024-09-05

生化试剂盒试验步骤有哪些 :   

1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。   

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。   

3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。   

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,   

5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的(酚,异戊chún)混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相   

6、用等体积的,异戊chún抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min.。   

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙chún。室温10min。2500rpm,离心10min。弃上清。   

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。   

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。   

以上实验步骤可供各位老师参考


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